PCR實驗中DNA回收實驗步驟

【實驗原理】1.DNA片段回收方法：DNA片段在適當(dāng)濃度的瓊脂糖凝膠中，通上一定電壓進(jìn)行電泳，不同大小的DNA分子由于遷移率的不同而分離開。切下帶有所需DNA片段的凝膠，用凍融法、玻璃奶回收法或商品化膠回收試劑盒將目的片段回收純化。2.利用Taq酶能夠在PCR產(chǎn)物的3’末端加上一個非模板依賴的A，而T載體是一種帶有3’T突出端的載體，在連接酶作用下，可以把PCR產(chǎn)物插入到質(zhì)粒載體的多克隆位點，可用于PCR產(chǎn)物的克隆和測序。商品化的T載體有很多。本實驗采用TaKaRa公司的pM...

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全自動細(xì)胞計數(shù)儀-細(xì)胞計數(shù)方法

細(xì)胞計數(shù)是確定培養(yǎng)中鋪板的細(xì)胞濃度、確定細(xì)胞活力和評估細(xì)胞分離程序結(jié)果的一個組成部分。建議在細(xì)胞分離之前進(jìn)行初始細(xì)胞計數(shù)；然后可以將該數(shù)字與細(xì)胞分離后的細(xì)胞計數(shù)進(jìn)行比較，以計算細(xì)胞恢復(fù)率。此外，當(dāng)預(yù)期細(xì)胞活力可能會降低時，應(yīng)進(jìn)行活細(xì)胞計數(shù)，例如，在處理冷凍保存的細(xì)胞或離體操作的細(xì)胞時。本文描述了如何使用3%乙酸和亞-CH3藍(lán)進(jìn)行總有核細(xì)胞計數(shù)，以及如何通過臺盼藍(lán)染料排除進(jìn)行活細(xì)胞計數(shù)。實驗步驟和方法：I部分：樣品制備選項1：用3%乙酸和亞-CH3藍(lán)對總有核細(xì)胞計數(shù)進(jìn)行細(xì)胞稀釋...

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SDS堿裂解法制備質(zhì)粒DNA簡介

近些年來，隨著PCR技術(shù)的出現(xiàn)，以及DNA克隆和測序方法的發(fā)展，對大量質(zhì)粒載體和重組子的需求也大大減少。在本方案中，通過堿裂解法的放大（BirnboimａndDoly1979）,質(zhì)粒DNA可從清亮的細(xì)菌裂解物中通過含有漠化乙錠的CsCl梯度離心來進(jìn)行純化。無論是高拷貝數(shù)的質(zhì)粒還是低拷貝數(shù)的質(zhì)粒，通過這種方法可以得到每毫升3?5^g的DNA。重組子的質(zhì)粒一般產(chǎn)量較少，這取決于克隆的DNA片段的大小和特點。材料為正確使用本方案中的器材和危險試劑，必須查閱相應(yīng)的材料安全數(shù)據(jù)表并咨詢...

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高效消毒劑有哪些

潔凈室和潔凈區(qū)必須定期清潔和消毒。這通常使用清潔劑步驟進(jìn)行，然后使用消毒劑。可能需要用水去除消毒劑的殘留物。清潔和消毒也應(yīng)延伸到設(shè)備。此外，對于人員，消毒對于制藥企業(yè)來說很重要。那么高效消毒劑有哪些？本文介紹了在制藥設(shè)施中實際應(yīng)用清潔和驗證程序時要考慮的關(guān)鍵點，重點是消毒劑的選擇。洗滌劑對于潔凈室，需要使用清潔劑去除“污垢”（蛋白質(zhì)、油脂等）。洗滌劑滲透污垢并降低表面張力（將土壤固定在表面）以使其去除。為了使消毒劑有效工作，這是必要的。此外，懸浮中的微生物很容易通過沖洗去除或...

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潔凈室消毒方法和使用消毒劑的注意事項

潔凈室是實驗室中重要的區(qū)域，潔凈室的消毒措施也是重要的，那么潔凈室消毒的注意事項有哪些？一、消毒制度的制定潔凈室清潔和消毒涉及許多重要步驟，所以需要制定嚴(yán)格的消毒標(biāo)準(zhǔn)、消毒方法等。二、清潔、打掃在制藥業(yè)中，清潔是指從表面去除殘留物和污垢的過程，以達(dá)到表面清潔的效果。在進(jìn)行清潔的過程中一般會使用清潔劑，因為清潔劑可以通過滲透污垢和降低表面張力（將污垢固定在表面）來去除污垢。對于潔凈室，在使用消毒劑之前同樣需要有清潔的步驟。也就是在使用消毒劑之前，清潔設(shè)備表面等，從而保證良好的消...

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